Иммунохимические методы исследования крови, мочи, кала

Иммунохимические методы исследование - что это такое?

Иммунохимическое исследование - это метод молекулярной иммунологической диагностики, используемый для оценки наличия специфического белка или антигена в клетках с использованием специфического антитела, которое связывается с ним, что позволяет визуализировать и анализировать под микроскопом.

Иммунохимические методы анализа, основанные на специфическом связывании определяемого соединения соответствующими антителами, широко вошли в аналитическую практику и используются в различных областях медицины. Индикация образующегося комплекса «антиген-антитело» может быть осуществлена, если в один из исходных компонентов реакционной системы ввести метку, которая легко детектируется соответствующим высокочувствительным физико-химическим методом. анализ Иммунохимический нализ (ИХА) – это комплексная методика, которая определяет популяцию клеток, концентрацию сывороточных иммуноглобулинов, циркулирующие иммунные комплексы, параметры лейкоцитов, принимающих участие в фагоцитозе.

Методы иммунохимического анализа основаны на применении высокоактивных специфичных меток – маркеров, позволяющих обнаружить продукт иммунной реакции непосредственно в биологической жидкости. Удобными для этой цели оказались изотопные, ферментные, флюоресцентные, парамагнитные и другие метки, использование которых дало возможность увеличить чувствительность классических иммунохимических методов анализа в миллионы раз.

Такие исследования обладают высокой чувствительностью, специфичностью, используют минимальное количество биоматериала без предварительной пробоподготовки, позволяют получать объективные количественные результаты. Их можно использовать в диагностике заболеваний сердечно-сосудистой, эндокринной и других систем, для установления причин бесплодия, нарушения развития плода, в онкологии — для определения маркеров опухолей и контроля за эффективностью лечения, для определения концентрации в крови иммуноглобулинов, ферментов и лекарственных веществ.

Результаты этого анализа дают врачу точную картину для понимания возможности организма противостоять различным заболеваниям. В этот анализ входит проверка количества иммуноглобулинов и репродуктивных гормонов.

Принцип иммуноферментного анализа

Иммуноферментный анализ (ИФА) — вид иммунохимического анализа, основанный на высокоспецифической иммунологической реакции антигена с соответствующим антителом с образованием иммунного комплекса, для выявления которого используют в качестве метки фермент или ферментзависимое вещество.

В основе метода иммуноферментного анализа лежит оценка результатов иммунной реакции антигена с антителом. Полученный комплекс определяется следующим образом: в реакционную смесь вводят конъюгат, который включает ферментную метку, а также добавляют специальный хромогенный субстрат. Фермент, взаимодействуя с субстратом, изменяет его окраску. Учет результатов проводят фотометрически.

Иммунохимические исследования сыворотки крови

Иммунологический анализ крови – это метод лабораторного исследования, позволяющий оценить состояние общего иммунитета, его напряженность – то есть насколько защитная система организма задействована в момент анализа, определить количество и функцию иммунных клеток крови, присутствие в ней антител.

Антитела (англ. antibody) – это специальные белки иммуноглобулины (Ig), которые вырабатывает иммунная система в ответ на попадание любого чужеродного агента в организм для борьбы с ним. Антитела обладают способностью образовывать прочные комплексы с антигенами для последующего удаления их из организма.

К антигенам относятся белки, полисахариды, нуклеиновые кислоты, в том числе и в составе компонентов различных биологических структур (клеток, тканей, вирусов и т.д.).

Способность антигенов вызывать иммунный ответ называется иммуногенностью, а способность образовывать комплексы с антителами – антигенностью.

Иммунологический анализ способен выявить:

• первичный и вторичный иммунодефициты
• помочь при диагностике аутоиммунных, гематологических, инфекционных и лимфопролиферативных заболеваний

Иммунохимическое исследование позволяет определить уровень гормонов, антител, биологически активных молекул, в том числе для диагностики и контролирования анемии, заболеваний щитовидной железы, эндокринологических нарушений.

Иммуноглобулины – белки, обладающие активностью антител (способностью специфично связывать определенные антигены).

В отличие от большинства белков сыворотки крови, которые вырабатываются в печени, иммуноглобулины продуцируются плазматическими клетками – потомками стволовых клеток предшественников В-лимфоцитов в костном мозге. По структурным и функциональным различиям выделяют 5 классов иммуноглобулинов – IgG, IgA, IgM, IgD, IgE и ряд субклассов. Поликлональное увеличение количества иммуноглобулинов – нормальный ответ на инфекции.

Когда назначается иммунологический анализ крови?

Иммунологическое исследование проводится:

• в случае повторяющихся инфекционных заболеваний
• в случае если инфекционное заболевание носит тяжёлый и затяжной характер
• при подозрениях на врожденный или приобретенный иммунодефицит
• при подозрении на аутоиммунное заболевание
• при аллергических реакциях
• перед серьёзными хирургическими вмешательствами
• в случае, если послеоперационный период протекает с осложнениями
• в целях контроля за ходом лечения некоторыми группами медикаментов (иммунодепрессантами, иммуномодуляторами и т.п.)

Показатели иммунологического анализа крови

Иммунологический анализ включает в себя комплекс показателей, отражающих состав и функциональную активность основных клеток иммунной защиты в разбивке по видам клеток и продукты их деятельности (иммуноглобулины). Развернутый анализ иммунной системы является достаточно сложным, требующим много времени, поэтому в зависимости от цели исследования иммунологический анализ может быть ограничен показателями, представляющими конкретную функцию иммунитета или затрагиваемые конкретной патологией.

Чаще всего исследуются:

1. Субпопуляции лимфоцитов – белых кровяных телец, различные виды которых распознают чужеродные структуры (антигены), вырабатывают антитела, направленные против чужеродных агентов, регулируют интенсивность иммунных процессов, распознают и уничтожают изменённые клетки организма (например, раковые клетки). Иммуноглобулины – антитела, функцией которых является нейтрализация инфекционных возбудителей и токсинов. Прежде всего, исследуются иммуноглобулины классов A, M, G
2. Иммуноглобулины A (IgA) обеспечивают местный иммунитет слизистых оболочек. Повышенный уровень IgA отмечается при заболеваниях кожи, органов пищеварения и дыхания. Также это характерно при интоксикациях, алкоголизме, патологии печени и почек
3. Иммуноглобулины M (IgM) активно вырабатываются при первичной защитной реакции организма, поэтому их повышенное количество наблюдаются в начале любого заболевания. Повышенное значение IgM также наблюдается при заболеваниях печени (прежде всего гепатите или циррозе печени)
4. Иммуноглобулины G (IgG) - самый массовый класс иммуноглобулинов. Они являются основной защитой, вырабатываемой в ответ на проникновение в организм инфекции. Их задача – убивать грибок, вирус, патогенные бактерии, обезвреживать вырабатываемые возбудителем инфекции токсины. Именно они отвечают за длительный иммунитет, защищающий нас от повторного поражения инфекцией
5. Иммуноглобулины Е (IgE) и D (IgD), вырабатываются, в основном, в ответ на паразитарную инфекцию (поражение глистами) или в случае атопической аллергии. Для определения чувствительности организма к тем или иным аллергенам проводится специальное исследование – аллергопанель, выявляющее специфические антитела к конкретной группе аллергенов (как правило это иммуноглобулины классов Е или G)

 

Подготовка к иммунологическому анализу крови

Для того чтобы результаты анализа были точными, сдавать кровь следует натощак. Лучше всего это сделать утром. Оптимально пациент должен не есть и не пить ничего, кроме воды в течение 12 часов перед сдачей анализа. Накануне анализа не следует принимать алкоголь. В течение часа перед сдачей анализа желательно не курить.

Непосредственно перед сдачей анализа желательно присесть и находиться в покое 10-15 минут, чтобы исключить влияние физических и эмоциональных нагрузок на результаты исследований.

Иммунохимические исследования белков мочи

Иммунохимические методы исследования мочи применяются для того, чтобы врач мог оценить общее состояние организма, а также выявить даже малейшие отклонения в анализах, что указывает на определённые заболевания в начальной стадии. Данный анализ даёт детально точную картину заболевания и позволяет специалисту подобрать наиболее эффективный метод лечения. Преимущества иммунохимических методов исследования мочи перед другими существующими стандартными методиками заключаются не только в достоверно более высокой чувствительности в диагностике общей протеинурии (наличие белка в анализе мочи, что указывает на развитие воспалительных процессов разного характера в организме человека) , но также и в возможности выявления в этой биологической жидкости отдельных белковых компонентов, определении их особых характеристик, как бы, «протеомики» мочи или селективной протеинурии.

Мочу необходимо собирать в течение 24 часов, сохраняя обычный питьевой режим. Банку с мочой нужно хранить в прохладном месте. Утром, примерно в 6—8 часов освободить мочевой пузырь (эту порцию мочи вылить). Затем в течение суток собирать всю мочу в чистый сосуд емкостью  2 литра. Последняя порция берется точно в то же время, когда накануне был начат сбор (в 6—8 часов). Количество суточной мочи следует измерить мерным стаканом, отлить 10—50 мл в чистый пластиковый контейнер и доставить в лабораторию НМИЦ гематологии. При сдаче анализа в лабораторию нужно обязательно указать объем суточной мочи.

Исследования кала иммунохимические методом

Определение концентрации специфических белков непосредственно в кале достоверно отражает патологические процессы в желудочно-кишечном тракте. Кроме того, преимущества сбора кала в том, что это неинвазивная нестрессовая процедура, легкая в исполнении, можно при необходимости ее повторить.

Диагностика кишечных и желудочных заболеваний является частой процедурой для многих пациентов, иммунохимический анализ кала на скрытую кровь — наиболее безболезненный вариант обследования органов желудочно-кишечного тракта.

Иммунохимический анализ кала на скрытую кровь — это метод лабораторного исследования, с помощью которого возможно определить наличие кровяных выделений в испражнениях человека. Это свидетельствует о внутренних кровотечениях органов пищеварения.

Лечащий врач назначает данное исследование в случае если у пациента наблюдаются следующие симптомы:

• постоянные или периодические боли в области брюшной полости
• изжога, отрыжка, вздутие
• частая тошнота, рвота без причины
• нарушение нормального стула, частые поносы
• резкое снижение веса без видимых причин

Это исследование проводится для подтверждения диагноза язва, гастрит, наличия злокачественных и доброкачественных опухолей.

Основная цель проведения анализа кала на скрытую кровь — выявление внутренних деформаций и изменений стенок желудка и кишечника под действием воспалительного процесса. Исследование выполняется от трех до семи дней. Нарушения в желудочно-кишечном тракте, долгое время могут не иметь ярко выраженных симптомов. Часто человек даже не обращает внимания на незначительное недомогание или плохое самочувствие. Кроме того вкрапления крови в испражнениях могут быть настолько малы, что их трудно заметить невооруженным взглядом. Исследование кала на скрытую кровь позволяет во время обнаружить заболевание своевременно начать соответствующее лечение.

Процедура забора материала для анализа абсолютно безболезненна для пациента, в отличии от других методов диагностики заболеваний желудочно-кишечного тракта. Для того, чтобы анализ был максимально правдивым и информативным, необходимо соблюдать определённые условия предподготовки забора кала на скрытую кровь.

Нужно четко выполнять предписания по подготовке к анализу, чтобы исключить ошибочный результат исследования. За 7 дней до забора материала для исследования нужно:

• соблюдать строгую диету
• исключить из рациона все продукты, которые повышают гемоглобин - красные продукты: мясо, рыбу, яблоки, свеклу, томаты, шпинат, паприку, субпродукты
• нельзя пить напитки, содержащие краситель
• следует отказаться от принятия любых лекарственных средств,в том числе, народных средств, которые могут оказывать расслабляющее действие
• за неделю до сдачи анализа кала на скрытую кровь нужно исключить возможность механического травмирования прямой кишки и кишечника, отказаться от любых медицинских процедур, так как в клизма или колоноскопия
• за день до забора материала нельзя чистить зубы зубной щеткой, т. к. это может травмировать десны и спровоцировать кровоточивость
• девушкам нельзя выполнять сбор материала для исследования в период менструации и три дня после нее.

Кроме предварительной подготовки следует ответственно подойти к процедуре забора образцов для исследования. Нужно приобрести специальный стерильный контейнер для кала в аптеке. Образцы для диагностики не должны включать инородных примесей таких как вода, моча и т. д. Сбор материала следует осуществлять специальной ложкой, которая идёт в комплекте с контейнером. Количество образцов для тестирования на наличие скрытой крови должно быть строго определённым. Забор анализа необходимо доставить в лабораторию в течение трех часов, нельзя предварительно замораживать и размораживать образцы.

Что означает наличие скрытой крови в каловых массах

Небольшое количество крови в кале — нормальное явление, характерное для процессов жизнедеятельности человеческого организма. Стандартный уровень кровяных выделений не более 2 мг на 1 г кала, превышение этого показателя означает, что в испражнениях присутствует скрытая кровь, источник возникновения которой необходимо определить.

Положительный анализ кала на скрытую кровь может говорить о таких заболеваниях как:

• кишечный туберкулез
• язва желудка
• болезнь Крона
• полипы
• злокачественные и доброкачественные опухоли в желудке или кишечнике
• язвенный коллит
• глистные инвазии
• геморрой

Последующий анализ и расшифровку результатов может достоверно осуществить только специалист, который на основании дополнительных обследований желудочно-кишечного тракта сможет выявить причину отклонений, поставить верный диагноз и назначить лечение.

Как проводятся исследования в лаборатории?

В современной лаборатории исследования методом иммуноферментного анализа проводят с использованием коммерческих тест-систем. Основными характеристиками тестов являются два параметра: чувствительность и специфичность.

1. Чувствительностъ - это процент выявленных тест-системой позитивных образцов из множества положительных образцов, где все результаты были подтверждены, например сероконверсионные панели позитивных контрольных сывороток. Таким образом, чувствительность тест-системы является показателем вероятности появления ложноотрицательного результата. Ложноотрицательный результат — отрицательный результат, полученный в данной тест-системе для образца, который, на самом деле, является положительным
2. Специфичность - это процент выявленных негативных образцов из панели негативных контрольных сывороток. Соответственно, специфичность тест-системы - это показатель вероятности появления ложноположительного результата, т. е. положительный в данной тест-системе результат, полученный для образца, который, на самом деле, является отрицательным

Кроме подразделения тест-систем по исследуемому показателю (инфекционной диагностике, исследованию эндокринной системы, определению онкомаркеров и др.), тесты делятся на группы по своему целевому назначению.

Так, например, применительно к диагностике инфекционных заболеваний тест-системы бывают:

• скрининговые, те, что при первичном обследовании выявляют инфицированных
• диагностигеские, те, что используются при обследовании больных, у которых подозревается или есть определенная инфекция
• подтверждающие, которые используются как дополнительные после получения положительных результатов скринингового или диагностического теста
• тесты для мониторинга (оценка эффективности проводимой терапии). Используются для наблюдения пациента во время лечения

В медицинской лаборатории иммунохимические исследования проводятся при помощи иммунохимических анализаторов. Данное оборудование существенно упрощает процедуру проведения исследований предоставленных образцов. Ярким примером данного оборудования является автоматический иммунохимический анализатор Access-2.

Производитель данного оборудования: Бекмен Культер, Инк из США.

Система иммуноанализа Beckman Coulter Access 2 обеспечивает новый уровень эффективности в лаборатории. Оснащенная интуитивно понятным пользовательским интерфейсом, система Access 2 обладает усовершенствованной технологией обработки образцов и обширным меню. Сочетание широкого меню высококачественных анализов от Beckman Coulter с функциями повышения производительности обеспечивает любую лабораторию широким спектром возможностей для иммуноанализа.

Операторы могут просматривать время выполнения стойки и запуска в режиме реального времени на экране, а также просматривать информацию о запрошенных тестах, любых незавершенных работах и результатах. Пользователи также могут проверить состояние необходимых расходных материалов. Повторяющиеся и ручные процессы устраняются с помощью определяемого пользователем рефлекторного тестирования на иммуноанализаторе Beckman Access 2. Система анализатора Access 2 также даёт пользователям возможность подключать до четырех систем через один интерфейс LIS, обеспечивая при этом обмен информацией о результатах тестирования и запросах на тестирование.

Система Beckman обладает функцией бортового охлаждения, которое повышает стабильность реагентов. Также поддерживаются двадцать четыре анализа с непрерывным произвольным доступом и возможностью статистики. Удаленный мониторинг системы возможен путем проверки журналов событий прибора, информации о контроле качества и данных калибровки через модем.

Разработанная для повышения эффективности система иммуноанализа Beckman Coulter Access 2 обеспечивает упрощенный рабочий процесс с гибкой обработкой образцов. Система иммуноанализа включает в себя магнитное разделение частиц с технологией хемилюминесцентного детектирования для быстрой обработки анализа и широкого аналитического диапазона из удаленного места через модем.

Преимущества иммунохимического анализатора Access-2

1. Производительность до 100 тестов в час
2. Первый результат через 12-30 минут (зависит от аналита)
3. Количество реагентов на борту: 24 картриджа (1200 тестов)
4. Охлаждение реагентов на борту до + 4°С
5. Стабильность реагентов после вскрытия: до 56 дней
6. Стабильность калибровки: до 56 дней
7. Единовременная загрузка: 60 образцов
8. Объем образца: от 5 до 200 мкл, для большинства тестов менее 50 мкл
9. Функция детекции сгустка
10. Неограниченное количество срочных образцов в любое время
11. Возможность работы с первичными пробирками
12. Возможность дозагрузки всех компонентов анализа "на лету", не прерывая работу прибора, позволяет экономить время и повышает производительность лаборатории
13. Широкое, постоянно растущее меню тестов ориентировано на современные запросы, предъявляемые к иммунохимической лаборатории
14. Существующие и разрабатываемые тесты могут использоваться на любом из анализаторов Beckman Coulter (ACCESS 2 или UniCel DxI 600 / 800)
15. Конструкция картриджа, рассчитанного на 50 исследований и содержащего все компоненты анализа в растворенном виде, исключает возможное испарение реагентов на борту и возможные ошибки персонала на преналитическом этапе
16. Конструкция основного дозатора, совмещающего в себе функции дозатора и ультразвуковой мешалки полностью исключает контаминацию и обеспечивает оптимальное перемешивание реакционной смеси
17. Автоматическое назначение дополнительных тестов с использованием программируемых пользователем дополнительных критериев позволяет оптимизировать рабочу врача-лаборанта клинической лаборатории и медицинского учреждения в целом
18. Встроенная программа контроля качества: статистический и графический анализ результатов контроля качества по правилам Westgard и диаграммам Levey-Jennings позволяет осуществлять внутрилабораторный контроль качества по международным стандартам
19. Автоматический контроль и оповещение пользователя о состоянии реагентов и расходных материалов, сроках годности реагентов, расходных материалов и калибровок
20. Непрерывная работа без участия оператора до 3-х часов
21. Внешний компьютер и программное обеспечение на базе Windows XP cо встроенной системой помощи максимально упрощает диалог оператора с прибором и позволяет расширить архив до 200 000 исследований

Расшифровка иммунохимических исследований

Расшифровка результатов производится врачом-иммунологом, который учитывает данные осмотра, жалобы пациента и результаты других исследований. Наибольшее внимание уделяется значительным отклонениям от нормы (более 20%), меньшие отклонения могут быть вызваны случайными факторами – диетой, стрессами, физическими нагрузками, а также индивидуальными особенностями организма.

Важно! Материалы, опубликованные на данном портале, не должны истолковываться как совет или рекомендация и рассматриваться в качестве основания для принятия какого-либо решения или действия. В любом случае вам стоит обратиться к лечащему врачу за качественной диагностикой и лечением.